Concentratia tiolilor totali (proteici si neproteici) plasmatici

Concentratia tiolilor totali (proteici si neproteici) plasmatici

Tiolii neproteici sunt reprezentati in principal de glutation (GSH), iar cei proteici sunt constituiti in principal din proteine cu resturi de cisteina. Gruparile tiolice ale proteinelor sunt esentiale pentru stabilitatea si functionalitatea acestora.

In studiul de fata, concentratia tiolilor totali (proteici si neproteici) plasmatici a fost semnificativ scazuta la pacientii din lotul 2 fata de lotul 1. Diferenta mediei de varsta intre loturi poate explica acest rezultat, cu varsta glutationul plasmatic scade, iar disulfurile mixte ale proteinelor cresc. De asemenea, exprimarea tiolilor totali prin raportare la proteinele totale plasmatice a influentat rezultatul.

De mentionat corelatiile negative, semnificative statistic intre tiolii totali plasmatici si valoarea globulinelor serice in ambele loturi r= -0,76 (n=15, lotul 1) si respectiv r= -0,47 (n=23, lotul2).

Globulinele serice cresc in inflamatie. Se stie ca inflamatia se caracterizeaza prin procese oxidative si prin generare amplificata de specii reactive ale oxigenului (anionul superoxid O2^.-, radicalul hidroxil HO^.) si ale azotului ( anionul peroxinitrit ONOO^-).

Acumularea de polimorfonucleare la locul inflamatiei determina generarea crescuta de anion superoxid. Citokinele proinflamatorii stimuleaza sinteza hepatica a globulinelor serice si induc nitric-oxid sintaza, cu cresterea producerii de oxid nitric, care genereaza peroxinitrit.

oxidaza

Anion superoxid

NADPH + 2O_{2 NADPH} NADP ⁺ + H ⁺ + 2O₂^.-

NO + O₂^.- ONOO^-

oxid nitric  peroxinitrit

Generarea acestor specii rective ale oxigenului si azotului este responsabila de cresterea glutationului oxidat (GSSG) si a disulfurilor mixte ale proteinelor (PSSG sau PSSC). Ionii metalici necesari catalizei acestor reactii sunt eliberate de catre anionul superoxid de la suprafata proteinelor unde sunt slab legate. O alta sursa de metale tranzitionale devine disponibila ca urmare a deplierii proteinelor sub actiunea H₂O₂, staland astfel situsurile care le contin.

Scaderea tiolilor totali in lotul 2 se poate pune si pe seama reducerii concentratiei glutationului plasmatic.

Sugeram posibilitatea ca scaderea glutationului extracelular (plasmatic) in cataracta senila sa se datoreze (in parte) cresterii activitatii g-glutamil-transpeptidazei serice.

gGT

Glutation + aminoacid glutamilpeptid + L-cisteinilglicina

De remarcat ca numeroase studii caz-control releva valori serice crescute semnificativ statistic ale activitatii g-glutamil -transpeptidazei (gGT) la pacientii cu cataracta senila fata de martor. Donnelly et al., conchid ca activitatea crescuta a enzimei reflecta existenta unor boli hepatice la pacientii cu cataracta senila (datorita asocierii cu valori semnificativ crescute ale bilirubinei serice si ale fosfatazei alcaline)(Donnelly et al.1995).

Se stie ca rolul gGT este acela de a asigura adaptarea celulei la stres prin clivarea glutationului extracelular, furnizand astfel celulei aminoacizii necesari resintezei propri de glutation (un excelent antioxidant).

Consideram ca activitatea crescuta a g-glutamil-transpeptidazei serice, in cataracta senila, trebuie interpretata si in contextul mecanismelor oxidative deoarece s-a demonstrat ca stresul oxidativ are efect inductor asupra enzimei, iar majoritatea cercetatorilor includ cataracta senila in categoria bolilor de stres oxidativ (Whitfield 2001).

Whitfield subliniaza un posibil rol pro-oxidant al gGT, deoarece produsii reactiei catalizate de enzima, in prezenta fierului, genereaza specii radicalice (Whitfield 2001).

A.4.3.2 Albumina serica

La nivel extracelular, albumina are un important rol antioxidant prin legarea ionilor de cupru si a hemului. Prin gruparea -SH (la om, rest de cisteina in pozitia 34), albumina reactioneaza rapid cu acidul peroxinitros si acidul hipocloros si lent cu apa oxigenata. Oxidarea gruparilor tiol proteice, in principal ale albuminei, s-a dovedit a fi un indicator sensibil si specific al stresului oxidativ in compartimentul vascular (Radi et al 1991).

Determinarile personale indica o concentratie semnificativ scazuta a albuminelor serice la pacienti fata de martor. Valoarea scazuta a albuminelor serice se poate datora, fie unei sinteze scazute la nivel hepatic, fie unui clearance crescut. Consideram ca procesele oxidative vizand gruparile tiol ale albuminelor serice sunt mai accentuate in cataracta senila decat la martor si determina valori scazute ale acestora. Aceasta afirmatie este sustinuta de corelatia negativa intre valorile plasmatice ale MDA si albuminemiei, la pacientii lotului 1.

A.4.4.1 Raportul albumine/globuline serice

Pe loturile luate in studiu, proteinele totale si globulinele serice au avut valori crescute, iar albuminele serice si raportul albumine/globuline au avut valori scazute fata de martor. Pentru pacientii din lotul 2, variatia acestor parametri a fost semnificativa statistic, in timp ce pentru lotul 1, doar variatia albuminemiei a avut semnificatie statistica. Din literatura se stie ca rapotul albumine/globuline nu variaza semnificativ cu varsta, dar variaza functie de sex. Loturile luate in studiul nostru sunt omogene in ceea ce priveste repartitia pe sexe. In cataracta senila anomaliile proteice evidentiate ar putea fi puse pe seama unui proces inflamator sistemic.

Un argument pentru afirmatia de mai sus este activitatea semnificativ crescuta a ceruloplasminei plasmatice la pacientii din ambele loturi, fata de martor.

A.4.4.2 Ceruloplasmina serica

Activitatea ceruloplasminei plasmatice a crescut semnificativ la pacientii din ambele loturi, fata de martor, in concordanta cu globulinele serice.

Ceruloplasmina este o proteina de faza acuta si face parte din clasa a globulinelor. Enzima are si rol antioxidant prin activitatea feroxidazica: oxideaza Fe²⁺ la Fe³⁺ si faciliteaza preluarea fierului de catre transferina. De asemenea, este principala proteina transportoare de cupru, legand 90% din cuprul total plasmatic, restul cuprului plasmatic fiind legat de albumina, histidina sau de peptide mici.

Activitatea plasmatica crescuta a acestei enzime a fost raportata in cataracta senila (Metelisyna 1998) si la copii galactosemici cu sau fara cataracta (Szczypka et al. 1990).

Conform formulei Pearson, pentru lotul 1 s-a stabilit o corelatie pozitiva intre ceruloplasmina si globuline (r=0,74 pentru n=15) si o corelatie negativa intre ceruloplasmina si raportul albumine/globuline (r== -0,68 pentru n=15), ambele cu semnificatie statistica. Pentru lotul 2 (n=23), relatia ceruloplasmina-globuline este la limita semnificatiei statistice (r Aceste relatii sunt concordante in context inflamator si probabil cresterea globulinelor se face, in parte, pe seama fractiunii a

Deoarece atat MDA cat si globulinele au valori crescute la pacienti fata de martor, putem considera ca inflamatia promoveaza peroxidarea lipidica sau produsii de peroxidare intretin procesul inflamator.

Rezultatele noastre se suprapun peste cele din literatura. Donnelly si colaboratorii au gasit, la pacientii cu cataracta (toate formele), concentratii semnificativ crescute ale proteinelor totale serice si ale albuminelor serice, cu un raport albumine/(proteine totale-albumine) (echivalentul raportului albumine/globuline) semnificativ scazut. Autorii studiului sugereaza posibilitatea existentei unei infectii (posibil cronice), la pacientii cu cataracta senila (Donnelly et al. 1993, 1995, 1997). Grupurile de cercetare, conduse de Schoenfeld si respectiv Leske au obtinut rezultate similare si anume, scaderea riscului cataractei mixte in conditiile existentei unui raport crescut albumine serice / globuline serice (Schoenfeld 1993, Leske 1995).

In studiul nostru, valoarea globulinelor, ca markeri ai inflamatiei, este crescuta la pacientii cu cataracta fata de martor, in special la cei varstnici (cu varsta peste 65 ani).

B) COMPARAREA CONCENTRATIILOR PARAMETRILOR STUDIATI LA PACIENTI CLASIFICATI DUPA CRITERIUL AFECTIUNILOR SOMATICE PREZENTE ALATURI DE CATARACTA SENILA

Avand in vedere ca mai mult de 60% dintre pacientii luati in studiu au si afectiuni somatice (ulcer peptic, hipertensiune arteriala, boala cardiaca ischemica), pentru parametrii sangvini determinati la pacienti s-a facut un calcul statistic pe loturi, selectionate in functie de prezenta sau absenta afectiunilor asociate cataractei senile.

Cele doua loturi au fost constituite din pacienti avand afectiuni somatice alaturi de cataracta senila (n=22 pentru lotul B) si respectiv din pacienti cu cataracta senila ca unica afectiune (n=16 pentru lotul C).

Mediile de varsta pentru cele doua loturi au fost apropiate: 68,94 ani (ESM=8,17) pentru lotul B si respectiv 70,5 ani (ESM=9,06) pentru lotul C.

Concentratia tiolilor totali plasmatici nu a variat semnificativ intre loturile B si C ale pacientilor..

Intre valorile plasmatice ale globulinelor si ale tiolilor totali la pacientii lotului C s-a determinat o corelatie negativa r= -0,48, semnificativa statistic. Acest rezultat este un argument al relatiei dintre inflamatie (cresterea globulinelor) si apararea antioxidanta plasmatica (scaderea prin consum a tiolilor totali plasmatici).

La pacientii din lotul B, corelatia dintre globuline si tiolii totali neproteici a fost la limita semnificatiei statistice, iar globulinele serice au avut valori semnificativ crescute fata de martor si fata de lotul C. Valoarea globulinelor serice nu a variat semnificativ intre martor si lotul C. Se poate afirma ca valoarea crescuta a globulinelor serice determinata la pacientii cu cataracta poate fi pusa pe seama bolii somatice asociata cataractei.

Concentratia plasmatica a MDA nu a variat semnificativ pentru loturile B si C fata de martor si valorile celor doua loturi au fost apropiate intre ele.

Observand loturile pacientilor impartite pe cele doua criterii (varsta si respectiv boli somatice prezente alaturi de cataracta), valorile cele mai mari ale MDA s-au inregistrat la pacientii lotului 1. Se stie ca valoarea plasmatica a MDA creste odata cu varsta (Rodanelli et al. 1997), dar media de varsta a martorilor se suprapune peste cea a pacientilor lotului 1, deci nu se pune problema interferentei varstei asupra rezultatului. Se poate conchide ca un proces intens de peroxidare lipidica favorizeaza instalarea precoce a cataractei senile.

B.4.3.2 Antioxidanti cu masa moleculara mica:albumina, bilirubina, acidul uric

Cu toate ca albumina serica si bilirubina serica au avut concentratii cuprinse in intervalul normalului pentru ambele loturi, valoarea lor a fost semnificativ crescuta la lotul C fata de lotul B. Concentratia albuminei serice din lotul C s-a corelat pozitiv cu cea a bilirubinei serice r=0,47 si negativ cu activitatea SOD eritrocitare r=-0,63. Luandu-se in considerare ca albumina este transportorul bilirubinei neconjugate, relatia de mai sus este justificata. Relatia dintre activitatea SOD si albumina serica preteaza la speculatii. Albumina poate reactiona cu apa oxigenata din compartimentul vascular, fiind o molecula de sacrificiu pentru protejarea membranei eritrocitului. De asemenea, s-a demonstrat ca H₂O₂, la concentratii plasmatice usor crescute peste cele fiziologice are efect inductor pentru SOD eritrocitara (Kosenko et al. 1997). In concluzie, pentru pacientii cu cataracta senila (ca singura patologie), corelatiile de mai sus se pot datora unui stres oxidativ bland, care poate fi reflectat de cresteri usoare ale H₂O₂ in sistemul circulator sangvin.

Pentru pacientii lotului B albumina serica s-a corelat pozitiv cu colesterolul seric. Aceeasi corelatie a fost determinata pentru pacientii lotului 1 si s-a considerat ca cei doi compusi actioneaza ca antioxidanti plasmatici de sacrificiu, protejand membrana eritrocitului.

B.4.4 Evaluarea procesului inflamator sistemic in cataracta senila

B.4.4.1 Raportul albumine/globuline serice

Se stie ca valoarea raportului albumine/globuline variaza in functie de sex si nu dupa varsta. Pentru loturile martor, B si C, repartitia functie de sex a pacientilor este foarte apropiata, cu diferente de maxim +/-5%. Raportul albumine/globuline a fost semnificativ scazut la pacientii din lotul B fata de lotul C si fata de martor. Diferentele acestui raport, dintre loturile B si C sunt usor de explicat datorita scaderii semnificative a albuminelor si cresterii semnificative a globulinelor din lotul B fata de lotul C. Probabil ca bolile somatice prezente alaturi de cataracta senila (boala ischemica cardiaca, HTA, bolile digestive) determina o sinteza redusa a albuminelor si o amplificare a sintezei globulinelor la nivel hepatic, in conditiile existentei unor procese inflamatorii in organism.

Cu toate ca intre martor si lotul C nu exista diferente semnificative ale concentratiilor globulinelor si albuminelor s-a determinat o scadere semnificativa a valorii raportului albumine/globuline. Se poate afirma ca in cataracta senila exista o ,,disproteinemie' fata de martor. Acest rezultat este in concordanta cu datele din literatura care atesta ca un raport scazut albumine/globuline reprezinta un factor de risc pentru toate tipurile de cataracta (Donnelly et al. 1995).

B.4.4.2 Ceruloplasmina serica

Activitatea ceruloplasminei a fost semnificativ crescuta pentru loturile B si C fata de martor si valorile au fost apropiate intre ele. Luand in considerare acest rezultat si calitatea de marker de inflamatie acuta a ceruloplasminei se poate spune ca la pacientii cu cataracta senila exista un proces inflamator independent de cel datorat unei posibile boli somatice asociate.

Daca se ia in considerare rolul de antioxidant plasmatic enzimatic al ceruloplasminei, activitatea ei crescuta, inregistrata pentru loturile B si C releva un mecanism de adaptare al organismului la un posibil stres sangvin crescut prezent in cataracta senila.

11. REZULTATE

Tabel 6. Rezultate

Tabelul 7. Corelatii simple liniare intre diversi parametri, corespunzatoare loturilor 1 si 2

Tabelul 8. Corelatii simple liniare intre diversi parametri, corespunzatoare loturilor B si C