DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECTIILOR PRODUSE DE COCI GRAM NEGATIVI

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECTIILOR PRODUSE DE COCI GRAM NEGATIVI

NEISSERIA GONORRHOEAE

N. gonorrhoeae sunt coci Gram-negativi, dispusi in diplo, reniformi, imobili, inconjurati de o structura capsulara comuna. In functie de structura capsulei exista mai multe serogrupuri. Sunt oxidazopozitive. Au nevoie pentru dezvoltare de medii de cultura imbogatite, avand cerinte nutritive crescute. Se dezvolta la 35-37^oC si in atmosfera cu 5-10% CO₂ in 24-48 ore.

Dupa patrunderea in organismul receptiv, in functie de calea de transmitere, bacteria se ataseaza pe mucoase (genito-urinara, rectala, faringiana, conjuctivala) si produce o supuratie acuta care se manifesta la 10 zile dupa contactul infectant. La barbati se localizeaza la nivelul uretrei, la femei, endocervical, dar se poate extinde si la nivelul uretrei, vaginului, glandelor Bartholin, trompelor uterine. Rareori poate disemina sangvin cu aparitia unor leziuni dermice, artrite, tenosinovite.

Diagnosticul de laborator in gonoree este numai direct.

Prelevarea trebuie sa aiba loc inainte de inceperea tratamentului. Daca pacientul se afla sub tratament trebuie intrerupt pentru 24-48 ore. Este bine de specificat cu ce antibiotic a facut tratament. Recoltarea este preferabil sa se faca pe cat posibil mai aproape de debutul infectiei. Este necesar sa se preleveze o cantitate suficienta pentru realizarea diagnosticului microbiologic: se vor recolta doua tampoane pentru examenul microscopic (coloratie Gram si albastru de metilen) si unul pentru cultura.

La barbat se recolteaza secretie uretrala. Recoltarea trebuie sa se faca dimineta, inainte de mictiune sau la cel putin doua ore dupa aceasta. Daca este cantitatea prea mica, se recomanda sa consume cit mai putine lichide in restul zilei si sa revina in dimineata urmatoare inainte de mictiune. Cultivarea se face imediat dupa recoltare pe mediu preincalzit la 37^oC sau se utilizeaza un mediu de transport (Amies cu carbune activat sau Stuart). De la recolta pana la cultivare nu trebuie depasite 6 ore. In cazul in care nu exista secretie se poate centrifuga urina si insamanta imediat pe medii de cultura.

La femei recoltarea trebuie efectuata de la nivelul colului uterin si a glandelor Bartholin in primele10 zile ale ciclului menstrual. Recoltarea dela nivelul colului se realizeaza dupa stergerea exocolului cu 2-3 comprese sterile pentru indepartarea secretiilor stagnante, apoi introducerea succesiv in col 1-2 cma 3 tampoane care sunt rotite usor. 1. pentru frotiu colorat Gram: peste 10 celule inflamatorii pe camp cu imersie sunt semnificative ! diplococi

2. cultura pentru gonococ.

3. frotiu Giemsa ! C. Trachomatis sau virus herpetic.

Pentru diagnosticul bartholinitelor se recolteaza exudat dela nivelul orificiului conductului glandular cu doua tampoane:1. examen microscopic, 2. cultura.

Pe preparatul microscopic se noteaza prezenta celulelor inflamatorii si a cocilor Gram negativi, dispusi in diplo, reniformi, imobili, inconjurati de o structura capsulara comuna, situati intra- si extraleucocitar.

Pentru cultura se utilizeaza medii selective (agar Muller-Hinton+supliment HYL sau Thayer-Martin cu Vancomicina, Colistin, Trimetoprim si Nistatin) sau neselective (geloza sange, geloza chocolat). Cultura se dezvolta dupa 24-48 ore. Conditiile sunt stricte: 5-10% CO₂ si 37^oC.

Coloniile sunt de tip S, 0,5-1 mm sau M, rotunde, cu marginile regulate, netede, transparente sau opace. Pe aceeasi placa pot aparea pana la 5 tipuri diferite de colonii. Daca dupa 72 ore nu se dezvolta colonii, placa este eliminata.

Identificarea se face in functie de:

caractere morfotinctoriale - se poate utiliza si coloratia fluorescenta.

Caractere de cultura - colonii.

Caractere biochimice - metabolizarea glucidelor (numai glucoza prin acidifierea mediului), citocrom-oxidazo pozitiv, catalaza intens pozitiv, identificare exoenzimatica pe sisteme API (NH), Quad Ferm+, RIM, Minitek, Gonochek II etc.

Caractere antigenice - LPZ cu 6 serotipuri (pot exprima simultan mai multe structuri antigenice diferite), coaglutinare din produsul patologic (ac antimembrana externa), imunofluorescenta indirecta ( cu ac monoclonali).

Prin biologie moleculara cu sonde nucleotidice, PCR, LCR (Ligase Chain Reaction) - sensibilitate si specificitate f bune,dar cost ridicat.

Antibiograma este recomandata de rutina pentru ca au aparut tulpini rezistente la Penicilina (plasmid care codifica o betalactamaza tip TEM sau cromozomial -penAB, mtrRCDE, ampABCD. Spectinomicina e utilizata numai pentru tratamentul gonoreei.

NEISSERIA MENINGITIDIS

Sunt coci Gram negativi, aranjati in diplo, cu habitatul la nivelul nasofaringelui, la 10-25% din populatie.

La examenul microscopic al L.C.R. se observa prezenta unui numar foarte mare de leucocite si a cocilor Gram negativi, reniformi, aranjati in diplo, cu fetele concave una spre cealalta, intra- si extraleucocitari.

Microorganismul este foarte sensibil la conditiile de mediu,in special de temperatura, umiditate.

Identificarea se poate face prin teste biochimice de producere de acid din glucoza si maltoza.

Diferentierea antigenelor polizaharidice permite incadrarea in grupe serologice. Exista trei grupe mari (A, B, C) si cinci subgrupe (X, Y, Z, Z¹=29 E, W135).

Meningococii sunt sensibili la Penicilina, Ampicilina, cefalosporine, Cloramfenicol, tetracicline, macrolide, Ciprofloxacin, sulfamide si alte antibiotice.

Vaccinul antimeningococic este pentru serogrupurile A si C.